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细胞冻存和复苏
采取“慢冻快融”的原则，慢速冷冻可使细胞内的水份渗出细胞外，减少细胞内形成冰晶的机会；快融以保证细胞外结晶快速融化，避免慢速融化水份渗入细胞内，再次形成胞内冰晶造成对细胞的损伤。
细胞冻存时需向培养基中加入冷冻保护剂，可保护细胞在冷冻时免受溶液损伤和冰晶损伤。冷冻保护剂可根据其是否穿透细胞膜分为渗透性和非渗透性两类：
1.渗透性冷冻保护剂可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。
2.非渗透性冷冻保护剂不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。
2. 选取对数生长期的细胞，弃掉细胞培养液，用细胞消化酶（如胰蛋白酶）进行消化，适时去掉消化液，加入少量新鲜培养液。悬浮生长的细胞不进行消化处理，直接将细胞收集于离心管中离心，1000 rpm，5-10 min；
3. 弃去上清液，逐渐加入适量预冷的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节细胞浓度在5×106～1×107/mL之间；
4. 将上述细胞分装于2 mL冻存管中，每管1-1.5 mL。在冻存管上标明细胞名称、冻存日期和操作者；
5. 冻存：标准的降温速率开始为-1～-2℃/ min，当温度降到-80℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2 h ，然后放入-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃水浴中，并不时摇动使其尽快融化；
2. 从37℃水浴中取出冻存管，在无菌条件下取出细胞，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀，以1000 rpm，5-10 min离心；
3. 弃去上清液，加入适量培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度后接种到培养瓶中，37℃培养箱静置培养；
以上就是关于细胞冻存和复苏的操作步骤，可以进行收藏哦~返回搜狐，查看更多
