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人类血液来源免疫细胞库建与管理规范pdf
ICS 07.080 C 04 SZDB/Z 深 圳 市 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件 SZDB/Z 185-2016 人类血液来源免疫细胞库建设与管理规范 The collection, processing, quality control and storage regulations for Human blood Immune Cells 2016 - 04 -08 发布 2016 - 05 - 01 实施 深圳市市场监督管理局 发布 SZDB/Z 185—2016 目 次 前言Ⅲ 引言Ⅳ 1 范围1 2 规范性引用文件1 3 术语和定义1 4 缩略词3 5 细胞库的机构设置3 6 细胞库的建设4 7 生产操作规范5 8 细胞库的管理7 附 录 A (资料性附录) 知情同意书示例12 附 录 B (资料性附录) 供者健康信息采集表14 附 录 C (资料性附录) PBMC 制备步骤15 附 录 D (资料性附录) PBMC 冻存步骤16 附 录 E (资料性附录) 样本入库编码规则17 参考文献18 I SZDB/Z 185—2016 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由深圳市发展和改革委员会归口。 本标准负责起草单位：深圳华大基因研究院。 本标准主要起草人：周欣、张曦、蔡姗、冀旭、张家文、彭冬秀、陈玉、黎苑杰、项榕、 李蕾、尹洁芳、贾佳。 本标准为首次发布。 II SZDB/Z 185—2016 引 言 自20世纪80年代以来，免疫细胞疗法备受关注，其系免疫疗法的一个重要分支，而后 者被美国国立卫生研究院列为除手术、化疗、放疗以外的第四大癌症治疗模式。在2000年 国际肿瘤生物治疗及基因治疗年会中指出“免疫细胞疗法是现在科技中唯一有可能彻底清除 癌细胞的方法” 。2009年我国卫生部颁布18号《医疗技术临床应用管理办法》，将免疫细胞 疗法纳入第三类医疗技术进行管理，正式批准开展其临床治疗。 目前免疫细胞疗法在临床治疗中主要以利用从人体外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell ，PBMC ）分离提取的T细胞为主，其采集过程方便、安全。2008年美国首 例利用从病人血液中分离，扩增并回输自体免疫细胞方法成功治愈恶性黑色素瘤癌症，案 例中的病人在追踪期内没有出现复发。2009年至2013年，免疫细胞的研究开始屡次登上诺 贝尔医学奖的舞台，其中美国科学家Ralph Steinman将建立在树突状细胞基础上的免疫细胞 个体化诊疗方案用于自己的胰腺癌治疗，并获得2011年诺贝尔医学奖。 世界范围内的免疫细胞库建设已经初具规模，在美国西雅图建立的HIV疫苗试验网 络，以及其制定的PBMC质量管理系统，已存储符合高标准要求的HIV病人的PBMC共计 23477例。2010年卫生部令79号，《药品生产质量管理规范》指出，对于免疫细胞治疗这类 方法需要有标准操作程序和产品的质量控制。我国的人类血液来源免疫细胞库建设在快速 发展中，但大多数此类细胞库未涉及到大规模的采集、长期性的存储模式，并存在样本管 理无序、分散而不集中、封闭而不开放、缺乏标准化流程、缺乏质控体系与信息化管理、 伦理学与法律不健全、低水平重复和浪费现象严重等重要问题。为此，建立人类血液来源 免疫细胞库的地方标准、国家标准，规范其存储，保证应用质量，保障人体健康，保障公 民的合法权益，并促进我国相关生物治疗技术的发展上具有重大的国际化战略意义。 III SZDB/Z 185—2016 人类血液来源免疫细胞库建设与管理规范 1 范围 本标准规范了人类血液来源免疫细胞库的机构设置、建设和管理。 本标准适用于人类血液来源免疫细胞库的建设与管理。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 1.1-2009 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写 GB 2894-2008 安全标志及其使用导则 GB/T 5458-2012 液氮生物容器 GB 7000.2-2008 灯具 第2-22部分：特殊要求 应急照明灯具 GB/T 12905-2000 条码术语 GB 13690-2009 化学品分类和危险性公示 通则 GB 15258-2009 化学品安全标签编写规定 GB/T 17172-1997 四一七条码 GB/T 18347-2001 128条码 GB/T 18883-2002 室内空气质量标准 GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求 GB 19652-2005 放电灯(荧光灯除外)安全要求 GB/T 20269-2006 信息安全技术 信息系统安全管理要求 GB/T 22278-2008 良好实验室规范原则 GB/T 27025-2008 检测和校准实验室能力的通用要求 GB 50016-2014 建筑设计防火规范 GB 50034-2013 建筑照明设计标准 GB 50052-2009 供配电系统设计规范 GB 50140-2005 建筑灭火器配置设计规范 GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范 GB 50351-2014 储罐区防火堤设计规范 AQ 3013-2008 危险化学品从业单位安全标准化通用规范 CNAS-CL05:2009 实验室生物安全认可准则 MH/T 1019-2005 民用航空危险品运输文件 WS/T 224-2002 真空采血管及其添加剂 WS/T 400-2012 血液运输要求 DB12/597-2015 医疗卫生机构医疗废物处理规范 WHO Third Edition 实验室生物安全手册 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本指导性技术文件： 3.1 免疫细胞immune cell 1 SZDB/Z 185—2016 指参与免疫应答或与免疫应答相关的所有细胞，主要包括T细胞、B细胞、NK细胞、单 核-巨噬细胞、树突状细胞、粒细胞等。 3.2 样本specimen 指在某特定时间从受试者或捐献者采集到的器官、组织、血液等样本。对于某些人类样 本，样本可以表示个体的意思。 3.3 外周血单个核细胞peripheral blood mononuclear cells 指人外周血中具有单个核的细胞群体，包括淋巴细胞和单核细胞。单核细胞经细胞因 子诱导可分化为树突状细胞，是人体内最重要的抗原提呈细胞。淋巴细胞包括T淋巴细胞和B 淋巴细胞，分别承担人体免疫系统中的细胞免疫和体液免疫，在体外用多种细胞因子共同诱 导培养获得的一群异质细胞，称为细胞因子诱导杀伤细胞CIK，具有T淋巴细胞强大的抗瘤活 性和自然杀伤细胞的非MHC限制性杀瘤特点。 3.4 接收区 acceptance zone 指样本送达时用于初步检查、清点接收或样本转移前进行包装、清点的缓冲区域。 3.5 细胞制备cell preparation 指细胞样本经过一系列规范操作达到入库标准的过程。 3.6 细胞分离cell isolation 指从机体组织或器官中分离出特定细胞成分的过程。 3.7 质量控制quality control 指为使细胞样本达到入库标准所采取的操作技术和活动。 3.8 细胞冻存液cell freezing medium 指由特殊配方制备而成用于细胞冻存的无菌液体。 3.9 细胞复苏cell recovery 指把冻存的细胞恢复生长并保持原有特性的方法。 3.10 实验室生物安全laboratory biosafety 指实验室的生物安全条件和状态不低于允许水平，并符合相关法规和标准对实验室生 物安全责任的要求，避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害。 3.11 化学安全chemistry safety 2 SZDB/Z 185—2016 指使用化学物品时遵守一定的规范并有相应的紧急预案应对事故,防止危险化学品事故 的发生并将事故的影响或损失降至最低。 3.12 知情同意informed consent 指具有完全民事行为能力的自然人，在充分获取信息并准确理解其内容后，作出参与 研究的决定，此决定不受恐吓、利诱或其他不当行为的影响。 3.13 伦理审查委员会institutional review board 指专门负责对科学研究中涉及的伦理道德问题进行评估和审查的组织。 3.14 科学审查委员会scientific review committee 指专门负责对生物样本采集和使用的方案进行科学性审查的组织。 3.15 生物安全评审委员会biosafety review committee 指专门负责制定生物安全政策和安全操作规范的组织。 4 缩略词 NIH: 美国国立卫生研究院（National Institutes of Health ） HIV: 人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus ） TP: 梅毒螺旋体（Treponema Pallidum ） HBV: 乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus ） HCV: 丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus ） ALT: 谷丙转氨酶 (Alanine Aminotransferase) WHO: 世界卫生组织（World Health Organization ） GMP: 药品生产质量管理规范（Good Manufacturing Practice ） PBMC: 外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells ） DC: 树突状细胞 (Dendritic Cell) NK: 自然杀伤细胞 (Natural Killer Cell) CIK: 细胞因子诱导杀伤细胞 (Cytokine-induced Killer Cell) AABB: 美国血库协会 (American Association of Blood Banks) ATCC: 美国菌种保藏中心（American Type Culture Collection ） 5 细胞库的机构设置 5.1 伦理审查委员会 5.1.1 细胞库应设有伦理审查委员会。伦理审查委员会由医药学、伦理学、法学等专家以 及无利害关系的社区代表等人员组成。 5.1.2 伦理审查委员会应负责建立细胞库的伦理准则和相应的伦理操作规范，对相关伦理 问题进行审查和评价。 5.1.3 伦理审查委员会应在样本相关研究项目开始前进行伦理审查及对已通过审查或正在 进行的项目进行伦理监督，遵循样本提供者有知情同意权，隐私保护权，可能范围内风险最 小的原则，保证样本提供者和相关人员的利益和安全。 5.2 科学审查委员会 3 SZDB/Z 185—2016 5.2.1 细胞库应设有科学审查委员会。科学审查委员会应由生物和医学领域的专家组成。 5.2.2 科学审查委员会应负责对生物样本采集和使用的方案进行科学性审查。 5.3 生物安全评审委员会 5.3.1 细胞库应设有生物安全评审委员会。生物安全评审委员会应由生物学家、医务人员、 技术人员和实验室管理人员等各方面的专家或工作人员组成。 5.3.2 生物安全评审委员会负责细胞库的生物安全政策和安全操作规范的审查。 6 细胞库的建设 6.1 总则 细胞库实验区域和储存区域的设计以及设施的规划应符合GB 50346-2011 的规定，实验 室设施与设备应符合临床应用级别的安全操作要求。 6.2 细胞库的规划 6.2.1 细胞库场地要符合长久储存要求，避免频繁更换储存场地。 6.2.2 细胞库的设计和建设应符合GB 19489-2008 的规定，功能区域应至少包括辅助区（样 本接收区、样本预处理区、仓储区）、细胞制备区、质量控制区、细胞储存区等区域，每个 区域应标识洁净级别和风险级别。 6.2.3 细胞库的办公区域设计应符合GB 19489-2008 第5 章实验室设计原则及基本要求的 规定，与进行细胞操作的实验区域之间应有墙壁进行物理隔开，以确保办公区域的空气质量 不受实验区域空气的影响。 6.2.4 细胞库的建设应由具有相应资质的施工单位进行。建设所用材料应符合要求，达到 防强酸、防强碱、防震等效果。细胞库建设完成后，各功能区域的洁净级别应由专业的检测 人员进行检测并出具合格证明。 6.3 实验室设施与设备 6.3.1 空调与通风系统 细胞库的空调与通风系统应符合GB 19489-2008 第6.3.3条通风空调系统的规定，气流由 “清洁”空间向“污染”空间流动，最大限度减少室内回流与涡流。实验室各个区域的温度 与湿度应控制在规定范围内。 6.3.2 照明系统 细胞库的照明系统应符合GB 19489-2008 第6.3.7条照明系统的规定，免疫细胞库及实验 室的核心工作区的照度不低于350lx，其它区域不低于200lx 。 6.3.3 备用电源 细胞库的供电系统应符合GB 19489-2008 第6.3.6条电力供应系统的规定，应急照明不得 少于30分钟，需安装后备电池或者与后备发电机相连，并符合GB 7000.2-2008 的规定。 6.3.4 安全设施 细胞库的安全设施应具备保障常规物理安全及生物安全的功能，应符合GB 19489-2008 第6.3.8条自控、监视与报警系统的规定以及第7.22条消防安全的相关规定，保证实验室安全 有效地运行。 6.3.5 实验设备 细胞库的实验设备主要包括生物安全柜、离心机、二氧化碳培养箱、细胞计数仪、程序 降温仪、液氮罐，生物安全柜应符合二级B 型生物安全柜要求，对工作人员、环境和样本 提供保护。液氮罐应设有温度报警和液面控制装置。所有设备的选择均应符合通用要求。 4 SZDB/Z 185—2016 7 生产操作规范 7.1 样本的采集 7.1.1 血液样本的采集应符合《血站基本标准》中血液采集的相关规定。 7.1.1.1 样本提供者须做血液初、复检，合格后方能采用。采血人员应具有资格证书，培 训考核合格者方能上岗。 7.1.1.2 采集过程应符合无菌操作规程，所使用的一次性注射器、采血袋等耗材必须是有 效期内的。 7.1.1.3 采血人员采集时应轻摇血液，防止凝血或溶血。 7.2 样本的运输 7.2.1 血液样本的运输应符合《血站质量管理规范》第17 章中血液运输的相关规定以及 WT/S 400-2012 血液运输要求的规定。 7.2.1.1 血液样本运输前应与采集人员核对采集信息，样本采集完后应立即送往实验室。 若特殊情况不能及时送达，应及时放在4 ℃冰箱冷藏，且样本抵达时间不能超过12h。 7.2.1.2 血液样本运输应使用专门的血液运输箱，运输过程应实时监控运输箱状态，确保 箱体内温度维持在4 ℃左右，并做好运输前、中、后温度记录，且防止箱体剧烈震荡。 7.3 样本的接收 7.3.1 样本接收时，做好自我防护工作，应戴好手套与口罩，确认送达接收室的样本及信 息记录是否齐全。 7.3.2 观察样本容器包装的外观，检查有无破损并记录，检查信息记录表上的信息是否与 样本信息对应，确认无误后进行接收。 7.3.3 样本接收后应及时将信息反馈给样本发送方。 7.4 免疫细胞的制备 应建立免疫细胞制备的标准操作规程及管理程序，并在符合GMP 的标准上严格执行。 免疫细胞库的主要储存类别为PBMC 。PBMC 的制备步骤见附录C 。 7.5 免疫细胞的冻存 免疫细胞的冻存需加入适当的冷冻保护液，按照标准密度进行冻存，遵循程序降温的 原则。在符合GMP 要求的基础上严格执行，并进行严格的质量控制。PBMC 的冻存步骤见 附录D 。 7.6 细胞入库 7.6.1 细胞入库必须有严格的过程控制及完整的信息录入、档案填写。 7.6.2 将冻存好的细胞移至细胞暂存库中储存，储存温度为-196℃～-135℃，同时对细胞 样本进行质量检测，包含细胞数量与活率检测，细胞无菌性鉴定（需氧菌及真菌检测、厌氧 菌及真菌检测）、支原体检测、细菌内毒素检测、细胞纯度鉴定 （流式检测）、细胞功能鉴 定（Elisa 检测）。 7.6.3 将符合入库标准的细胞从细胞暂存库转移至细胞储存库中，在储存温度为-196℃～ -135℃的液氮罐中长期储存。 7.7 细胞复苏 建立细胞复苏标准操作程序并配备相应的信息记录。 a) 自液氮或干冰容器中取出冻存管，检查盖子是否旋紧。 5 SZDB/Z 185—2016 b) 将冻存管立即放入37℃水浴锅中解冻，轻摇冻存管使其在1 分钟内全部融化，以 75%酒精擦拭冻存管外部，移入无菌操作台内。 c) 取出细胞悬液，将解冻的细胞悬液加入含有培养基的离心管内，离心洗涤2～3 次， 加入新鲜培养基重悬细胞，混合均匀，转移至培养瓶，放入二氧化碳培养箱培养。 7.8 细胞出库 7.8.1 总则 细胞在需要使用、转移或销毁时，需进行细胞出库。细胞出库前应先向伦理审查委员会 和科学审查委员会提出申请，通过审核后方可进行。细胞库应建立人类免疫细胞使用、转移 和销毁的标准操作规程。 7.8.2 细胞使用出库 7.8.2.1 细胞出库基本程序：需要使用细胞时，细胞库出库人员填写能够记录细胞储存位 置变更的相关记录后，在质量管理人员监督并签字复核下，由细胞库出库人员进行出库。 7.8.2.2 临床治疗需使用细胞库内细胞时，细胞库出库人员需核对库存细胞信息和细胞使 用者信息，制定严格的细胞发放计划，再进行出库，并进一步跟踪使用情况。 7.8.2.3 科研用途使用细胞库的细胞时，需保证样本提供者在充分知情并签订知情同意书 （知情同意书见附录A ）的前提下完成细胞出库。 7.8.3 细胞转移出库 7.8.3.1 细胞库内部因整改、扩容或评估冻存细胞质量等情况而需要进行细胞转移时，按 照具体的细胞转移操作规范进行转移操作。 7.8.3.2 细胞转移操作应确保细胞及其冻存容器的温度在-135℃以下，转移过程要做好相 应记录。 7.8.4 细胞销毁出库 7.8.4.1 当样本储存时限超过20 年，样本提供者未与相关人员协定是否继续储存并不同意 无偿捐赠为科研样本时，统一由样本管理人员进行销毁，并将销毁情况更新记录在信息系统 中。 7.8.4.2 当样本提供者提出撤销知情同意书，要求销毁所提供的样本时，应遵从样本提供 者的意见将样本销毁，并将样本提供者相关信息和数据从信息系统中清除。 7.8.4.3 样本销毁应首先提出销毁申请，通过伦理审查委员会和科学审查委员会的审核后 方可进行，细胞库应建立销毁的标准操作规范，并按照此规范操作。 7.8.4.4 应对样本的销毁进行记录，包括销毁样本的名称与数量、销毁的原因、批准和执 行销毁的日期、销毁的操作人员等。 7.9 细胞发放 7.9.1 当样本提供者需要使用细胞库内本人细胞时，由细胞库出库人员填写细胞出库相关 记录后，由质量管理人员监督并签字复核下，由细胞库出库人员进行出库。并对细胞进行复 苏、培养、质量检测。 7.9.2 将符合发放标准的细胞发放，并填写发放记录。质量不合格的细胞需进行记录，且 不能发放。 8 细胞库的管理 8.1 总则 6 SZDB/Z 185—2016 细胞库应建立并实施质量目标、质量方针，遵循相关法律法规要求。明确在整个样本 采集、制备、储存的全过程中的质量要求，包括全面质量保证（QA ）和质量控制系统 （QC ），并以完整的质量体系文件形式明确规定及监控其有效性。确保所制备的免疫细胞 适用于预定的用途，符合规定的要求和质量标准。 8.2 人员管理 应确定细胞库工作人员的从业资质，制定培训与考核制度，保证良好的专业技能和操作 规范，以及员工健康管理制度，避免因人员因素产生生物安全危害。 8.2.1 人员资质 8.2.1.1 生产管理人员资质 生产管理人员应当至少具有相关专业本科学历，具有至少三年从事免疫细胞培养、实 验室管理以及质量管理的实践经验，其中至少有一年的细胞库管理经验，接受相关的专业 知识培训。 8.2.1.2 质量管理人员资质 质量管理人员应当至少具有相关专业本科学历，具有至少五年从事实验室管理和质量管 理的实践经验，接受过相关的专业知识培训。 8.2.1.3 实验室技术人员的资质 a) 必须具备相关专业教育经历，相应的专业技术知识及工作经验，熟练掌握自己工作 范围内的技术标准、方法和设备技术性能。 b) 必须进行上岗前体检，由生物安全负责小组组织实施。体检指标除常规项目外还应 包括与从事工作有关的特异性抗原、抗体检测。体检合格后建立健康监测档案不符 合岗位健康要求不得从事相关工作及进入实验室。 c) 在满足上述基本原则的前提下，必须是自愿从事相关实验活动，了解所从事工作的 生物安全风险，必要时在生物安全知情书上签字，并经实验室负责人批准后，才能 上岗工作。 8.2.1.4 样本提供者资格 样本提供者需提供近3个月内医院的健康体检报告和血液检测报告，血液检测报告中包 括血常规和五项传染病乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、谷丙转氨酶的检测。实验室需对样本提 供者提供的血液样本进行五项传染病乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、谷丙转氨酶的再次检测并 形成报告。样本提供者健康信息采集表见附录B，各项检测指标合格者，具备提供样本的资 格。 8.2.2 人员培训与考核 8.2.2.1 工作人员必须系统的接受相关生物安全知识、法规制度培训和业务岗位培训与考 核，领取岗位培训合格证书后方可上岗。 8.2.2.2 每年应至少培训并考核一次。考核未通过者，应重新接受培训，成绩合格后方可 再次上岗。 8.2.2.3 培训及考核结果应有相关档案记录及查阅制度。 8.2.3 人员健康管理 8.2.3.1 工作人员应进行严格体检，条件合格者方可录用。 8.2.3.2 如工作人员出现不宜从事实验室相关工作的身体状况时，不得进入相关区域工 作。 8
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