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细胞培养流程
细胞体外培养实验流程 一、 细胞复苏 1. 准备: 紫外照台 30min, 准备好高压灭菌好的吸管、移液管、离心管、废液缸、培养瓶、培养基（含 FBS）, 水浴箱开启到 37℃, 75%乙醇清洗双手, 培养基用前 37℃温育 20min, 酒精擦拭后放入无菌操作台, 点燃酒精灯。 2. 灼烧离心管管口、塞子和滴管, 用滴管取 5mL 培养基加入离心管中。 3. 戴好防护用具, 从液氮中取出冻存管后立即放入 37℃水浴箱中, 轻轻摇晃冻存管, 保证细胞 1min 内融化。以 75%酒精擦拭冻存管外部, 移入无菌工作台。 4. 用吸细胞液的从冻存管中将细胞悬液完全吸出加入到已装有培养基的离心管...
细胞体外培养实验流程 一、 细胞复苏 1. 准备: 紫外照台 30min, 准备好高压灭菌好的吸管、移液管、离心管、废液缸、培养瓶、培养基（含 FBS）, 水浴箱开启到 37℃, 75%乙醇清洗双手, 培养基用前 37℃温育 20min, 酒精擦拭后放入无菌操作台, 点燃酒精灯。 2. 灼烧离心管管口、塞子和滴管, 用滴管取 5mL 培养基加入离心管中。 3. 戴好防护用具, 从液氮中取出冻存管后立即放入 37℃水浴箱中, 轻轻摇晃冻存管, 保证细胞 1min 内融化。以 75%酒精擦拭冻存管外部, 移入无菌工作台。 4. 用吸细胞液的从冻存管中将细胞悬液完全吸出加入到已装有培养基的离心管中, 塞子塞离心管, 2000rpm, 离心 4min, 弃上清。 往离心管中加培养基（含 FBS）5mL, 用吸细胞悬液的滴管轻轻吹打, 使细胞混匀, 将离心管中的细胞悬液全部吸出加入到培养瓶中, 培养瓶平放, 轻轻晃动, 使细胞均匀贴壁, 标记好细胞名称、日期、培养人, 放入 37℃, 5%的 CO2 恒温培养箱培养。 收拾所用物品, 75%酒精喷洒消毒。 注意： 1. 离心时转速太高, 离心时间过久都易对细胞造成伤害。 滴管一定要严格分开, 不能混用, 防止细胞污染。 DMSO 常温下对细胞毒性较大, 故冻存细胞复苏后应立即洗涤冷冻保护剂。 二、 细胞换液 1. 将培养瓶从 CO2 培养箱中取出, 倒置显微镜下观察细胞生长状态（判断生长情况, 并确证未发生污染）后转入无菌操作台内。 2. 准备：紫外照台 30min, 准备好高压灭菌好的吸管、移液管、离心管、废液缸、培养瓶、培养基（含 FBS）, 水浴箱开启到 37℃, 75%乙醇清洗双手, 培养基用前 37℃温育 20min, 酒精擦拭后放入无菌操作台, 点燃酒精灯。 3. 酒精灯外焰灼烧培养瓶瓶口、瓶塞和滴管, 培养瓶倾斜, 吸出旧液, 尽量吸净。 4. 吸取培养基（含 FBS）5mL, 加到培养瓶中（FBS 终浓度为 10%）。（若死细胞较多则可以先用 PBS 洗一次, 再加培养基。） 将培养瓶与瓶盖过火, 旋紧瓶塞后回旋半圈, 平放回 CO2 培养箱。 收拾所用物品, 75%酒精喷洒消毒。 注意： 1. 打开和盖紧培养基、培养瓶前后均需旋转灼烧瓶口和瓶盖。 2. 各滴管一定要严格分开, 不能混用。 3. 将 PBS 注入到培养瓶中, 应将液体打到没有细胞的那一面。 4. 培养液以没过细胞为宜。 5. 细胞溶液变黄或死细胞过多时换液。
