如何正确地建立实验室细胞库?

1. 节省实验室空间、时间、经费2. 若实验失败,还有重来的机会3. 确保实验重复的一致性4. 确保未来实验的连贯性因此实验室有必要建立一个安全、规范、稳定、可追溯的细胞库,我们需要从源头保证整个研究实验的规范性。目前,世界上较权wei的细胞库机构或者研究院都采用三级细胞库管理模式,即:原始细胞库(pcb,primary cell bank),主细胞库(mcb,master cell bank),工作细胞库(wcb,working cell bank)。
原始细胞库(pcb,primary cell bank),又名细胞种子(cell seed)或初级细胞库(pre-master cell bank),由一个原始细胞群体发展成为传代稳定的细胞群体,或者经过克隆培养形成的均一细胞群体,经检定证明合格。将一定数量、成分均一的细胞悬液定量装于细胞冻存管,与液氮或-130℃以下冻存,即为原始细胞库,供建立主细胞库使用。
主细胞库(mcb,master cell bank)指的是,原始细胞库细胞传代增殖后均匀混合成一批,定量分装,保存于液氮或-130℃以下。这些细胞经检定合格后,即为主细胞库,供建立工作细胞库使用。
工作细胞库(wcb,working cell bank)是经过主细胞库传代增殖,达到一定代次水平的细胞,混合后制成一批均质细胞悬液,定量分装于一定数量的细胞冻存管,保存于液氮或-130℃以下备用。这些细胞经检定证明合格后,即为工作细胞库。
上面我们介绍过在进行各级细胞库的建立时,都要进行检定,合格后才可成为相应细胞库。细胞检定主要包括以下几个方面:细胞鉴别,细菌、真菌检查,支原体检查,细胞内外源病毒因子检查,致瘤性检查,必要时还须进行细胞染色体、细胞生长特性、细胞均一度及稳定性检查。
研究人员应检测并维护细胞库冻存器,以保证细胞库贮存在一个高度稳定的环境中。每种细胞库均应分别建立台账,详细记录放置位置 ,容器编号,分装及冻存数量,取用记录等。细胞库中的每支细胞冻存管均应具有细胞系/株名、代次、编号、冻存日期、贮存容器编号等信息。
为保证细胞冻存后仍具有良好的活力,每建立一级细胞库,冻存前的细胞活力应不低于90%,冻存后应取一定量的(可代表冻存全过程)冻存管,复苏细胞进行检测,复苏后细胞的活力应不低于80%。一般细胞冻存2-3天温度趋于稳定后,即可进行细胞活力检测。
原始细胞库、主细胞库和工作细胞库冻存多少数量,可根据自己的需要确定,只要满足后续科研实验需求即可,即遵循“够用原则”。一般经验来说,冻存的细胞密度为1-10×106 cells/ml,冻存体积1-1.5 ml/管。