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干细胞培养全流程（二）
3、在培养瓶中加入约2~3毫升浓度为1mg/ml的干细胞专用消化液，轻轻摇晃，使其均匀覆盖瓶底表面，随后置于37℃的培养箱内，静待细胞消化。
5、将含有脱落克隆的消化液转移至15毫升离心管中，静置片刻，待克隆自然沉降后，小心移除上层液体。然后加入3毫升H9完全培养基，轻柔地混合，静置片刻，待克隆再次自然沉降后，移除上层培养液。重复此过程一次，即用H9完全培养基漂洗两遍，沉降后吸取上清液。
6、加入3毫升H9完全培养基，使用1毫升移液器轻轻吹打2-3次，将克隆团吹散至原体积的约1/10（若希望获得较为均匀的克隆团，可在此时静置片刻，待细胞自然沉淀后，取中层液体中的悬浮克隆团进行传代）。传代比例取决于原瓶中克隆的密度与大小，通常为1:3至1:5之间进行传代。
1、按传代的方法将细胞消化下来，漂洗后细胞沉于离心管底部（上述传代中步骤5）。
2、依据母瓶的克隆密度与规模调整冷冻比例，通常一个T25培养瓶可分装为1至3支冻存管。在离心管中加入相当于冷冻体积一半的H9完全培养液，轻缓混匀以确保均匀。
4、使用1毫升移液器轻柔地混合细胞（保持克隆团的完整，避免过度吹打），在每支冻存管中加入500微升至1毫升的细胞悬液，并标注细胞名称、传代次数、冻存日期等相关信息。
关于干细胞培养全流程目前已经基本介绍完了，如您有其他的想法，欢迎留言讨论。返回搜狐，查看更多
